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HT115(DE3) 感受態(tài)細胞培養(yǎng)操作規(guī)程
發(fā)表時間:2022-06-15
HT115(DE3) 感受態(tài)細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人腦靜脈血管平滑肌細胞完全培養(yǎng)基
人腦膜細胞完全培養(yǎng)基
人神經(jīng)元細胞完全培養(yǎng)基
人神經(jīng)少突起前質(zhì)膠質(zhì)細胞完全培養(yǎng)基
人神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞完全培養(yǎng)基
人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞完全培養(yǎng)基
人腦微血管內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基
人腦成纖維細胞完全培養(yǎng)基
人小腦顆粒細胞完全培養(yǎng)基
人晶狀體上皮細胞完全培養(yǎng)基
人角膜上皮細胞完全培養(yǎng)基
人視網(wǎng)膜色素上皮細胞完全培養(yǎng)基
人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基
人角膜成纖維細胞完全培養(yǎng)基
人小梁網(wǎng)細胞完全培養(yǎng)基
人視網(wǎng)膜muller細胞完全培養(yǎng)基
人角膜內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基
人脈絡(luò)膜微血管細胞完全培養(yǎng)基
人牙周膜成纖維細胞完全培養(yǎng)基
大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基
大鼠肺血管平滑肌細胞完全培養(yǎng)基