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- 品牌：聯(lián)祖
- 產(chǎn)地：進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
- 貨號(hào)：LZR85353
- 發(fā)布日期： 2020-11-23
- 更新日期： 2025-06-03
| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
| 品牌 | 聯(lián)祖 |
| 貨號(hào) | LZR85353 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡(jiǎn)便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；
◇高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：棉花內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)sad1基因探針法PCR試劑盒供應(yīng)商
貨號(hào)：LZR85353
產(chǎn)品規(guī)格：50次
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
需要注意：
PCR反應(yīng)液請(qǐng)?jiān)诒信渲疲缓笾糜赑CR反應(yīng)儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種冷啟動(dòng)法（Cool Start Method）與熱啟動(dòng)法（Hot Start Method）相結(jié)合，更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應(yīng)，增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性，能得到良好的PCR結(jié)果。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長(zhǎng)一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長(zhǎng)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒DNAout。
2.如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)陽性對(duì)照和一個(gè)陰性對(duì)照。陽性對(duì)照是在 200μL 水中加 10μL PCR 陽性對(duì)照作為陽性對(duì)照，陰性對(duì)照是直接用 200μL 水作為陰性對(duì)照。提取結(jié)束后，*得到 200μL 模板 DNA（每個(gè)樣品）放冰上待用，溶解 DNA 沉淀的溶液不能少于 200μL，否則PCR 抑制物很可能會(huì)抑制 PCR。二、PCR（60 μL 體系）
3.樣品管：在 N+2 個(gè)PCR 管中加入下列成分：成分 N 個(gè)樣品管 陰性對(duì)照 陽性對(duì)照PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL PCR 引物對(duì) 各 2 μL 2 μL 2 μL 樣品 DNA 模板 各 18 μL - - 陽性對(duì)照（純化后） - 18 μL - 陰性對(duì)照（純化后） - - 18 μL電泳檢測(cè)
4.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳（本產(chǎn)品不需要單獨(dú)加loading buffer），使用 100 bp DNA Marker，如果樣品為陽性，將會(huì)得到長(zhǎng)度為 3582 bp 的擴(kuò)增產(chǎn)物。
二反應(yīng)的準(zhǔn)備：
待各組份融化后先瞬時(shí)離心，然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系，每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽性對(duì)照，測(cè)試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過程中應(yīng)注意無菌，戴口罩，并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染，推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。
三、PCR反應(yīng)：
降落PCR法(Touchdown PCR)：94℃變性2分鐘;首循環(huán)：94℃變性30秒，68℃退火30秒，72℃延伸45秒;八個(gè)循環(huán)開始，每循環(huán)退火溫度下降1℃，其余不變;從第九個(gè)循環(huán)開始，反應(yīng)條件固定為：94℃變性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，循環(huán)32次;循環(huán)結(jié)束后，在72℃延伸7分鐘，*保持在4℃。
標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：
產(chǎn)品僅用于科研如非指出，所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
1.液氮充分研磨樣品。
2.收集研磨成粉末的50mg樣品，置于1.5ml離心管中。
3.加入350μl65℃預(yù)熱的緩沖液IL，并加入20μl蛋白酶K劇烈地漩渦振蕩，確保所有的組織團(tuán)都分散均勻。
4.65℃水浴20-30min。水浴期間顛倒樣品數(shù)次。
5.加入350μl氯仿，充分混勻，12,000 rpm(~13,400×g)離心5分鐘。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml離心管中。注意確保不要打散沉淀團(tuán)或把組織碎片也一起轉(zhuǎn)移。
7.加入4μl RNase A，渦旋混勻。室溫放置2min。
8.加入二分之一上清體積的緩沖液IB與等體積的無水乙醇，充分混勻。如：向300μl上清中加入150μl緩沖液IB與300μl無水乙醇。
9.把上述混勻的液體轉(zhuǎn)移到吸附柱上。10,000×g離心1 min以結(jié)合DNA，棄去濾出液體。純化柱*容量為750μl,如果混合液大于750μl,請(qǐng)分兩次過柱。
10.將吸附柱重新套回收集管中，加入500μl緩沖液WB至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
11.將吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；
注意：DNA Wash Buffer使用前須按要求用無水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；
13.將吸附柱重新套回2ml收集管中，轉(zhuǎn)速（>13000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對(duì)下面的洗脫步驟至關(guān)重要。
14.將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-150μl65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB至柱子的膜中央。室溫靜置5min；
15. 室溫下，離心(>13000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA的流出液。將DNA儲(chǔ)于-20℃。
小鼠醛固酮（ALD）elisa分析檢測(cè)試劑盒β-Actin (D6A8) Rabbit mAb (HRP Conjugate)100 ul
小鼠凝血因子Ⅻ（FⅫ）elisa分析檢測(cè)試劑盒Btk (D3H5) Rabbit mAb (Biotinylated)100 ul
小鼠凝血因子Ⅰ（FⅠ）elisa分析檢測(cè)試劑盒Acetyl-NF-κB p65 (Lys310) (D2S3J) Rabbit mAb20 ml
小鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）elisa分析檢測(cè)試劑盒SignalFire™ Plus ECL Reagent100 ml
小鼠骨特異性堿性磷酸酶B（ALP-B）elisa分析檢測(cè)試劑盒SignalFire™ Plus ECL Reagent100 ul
小鼠高敏甲狀腺素（u-T4）elisa分析檢測(cè)試劑盒FoxP3 (D6O8C) Rabbit mAb100 ul
小鼠甘油三酯（TG）elisa分析檢測(cè)試劑盒VEGF Receptor 2 (D5B1) Rabbit mAb (PE Conjugate)500 ul
小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)elisa分析檢測(cè)試劑盒SimpleChIP® Mouse NQO1 Promoter Primers100 ul
小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白5（MCP-5）elisa分析檢測(cè)試劑盒RIP4 Antibody100 ul
小鼠催乳素（PRL）elisa分析檢測(cè)試劑盒Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb100 ul
小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）elisa分析檢測(cè)試劑盒CLIC4 (D2A7D) Rabbit mAb100 ul
小鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9（FGF9）elisa分析檢測(cè)試劑盒Lefty1 (D7E3G) Rabbit mAb100 ul
小鼠補(bǔ)體蛋白4（C4）elisa分析檢測(cè)試劑盒Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb (HRP Conjugate)100 ul
小鼠白三烯D4（LTD4）elisa分析檢測(cè)試劑盒SirT2 (D4O5O) Rabbit mAb1 Kit
小鼠阿立新A（Orexin A）elisa分析檢測(cè)試劑盒PDGF Receptor Activation Antibody Sampler Kit100 ul
小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白（LAT）elisa分析檢測(cè)試劑盒FoxP3 (D6O8R) Rabbit mAb20 ul
小鼠GTP酶 KRas elisa分析檢測(cè)試劑盒FoxP3 (D6O8R) Rabbit mAb100 ul
棉花內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)sad1基因探針法PCR試劑盒供應(yīng)商Trichoderma│sp.提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 。培養(yǎng)基: CM0014生長(zhǎng)條件: 25-28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
Trigonopsis│variabilis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0013生長(zhǎng)條件: 20℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Escherichia│coli分離基物: 犢牛提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 科研及血清定型培養(yǎng)基: 335生長(zhǎng)條件: 37存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;
Erythrobacter│sp.分離基物: 水樣/上層海水提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 好氧不產(chǎn)氧光合異養(yǎng)細(xì)菌多樣性研究 海洋可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性研究培養(yǎng)基: 511生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
Mycobacterium│tuberculosis提供形式: 凍結(jié)物安全等級(jí): 3模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0125生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
Acinetobacter│venetianus分離基物: 水樣/表層海水提供形式: 凍干物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 有機(jī)污染物降解菌/石油烴類降解菌；生物活性微生物/產(chǎn)表面活性物質(zhì)培養(yǎng)基: 745生長(zhǎng)條件: 26℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
Escherichia│coli分離基物: 病料提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究培養(yǎng)基: 335生長(zhǎng)條件: 37存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法;
傷寒沙門氏菌種屬: Salmonella│typhi提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 致病菌檢測(cè)芯片 培養(yǎng)基: 2生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
Aspergillus│sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 25存儲(chǔ)條件: 定期移植法
